CY5.5-卵清蛋白（Cy5.5 labeled ovalbumin）是一種重要的熒光標記物，由近紅外熒光染料CY5.5與卵清蛋白（ovalbumin, OVA）通過化學方法共價連接而成。以下是對CY5.5-卵清蛋白的詳細介紹：

一、組成與結構

CY5.5-卵清蛋白由兩部分組成：近紅外熒光染料CY5.5和載體蛋白卵清蛋白。CY5.5是一種具有優(yōu)異光學特性的近紅外熒光染料，而卵清蛋白則是一種常用的生物大分子載體，具有多個反應性位點，如賴氨酸殘基上的氨基，可以與CY5.5的活性基團（如NHS酯）進行共價連接。

二、特性

1.熒光特性：CY5.5染料的激發(fā)波長約為675nm，發(fā)射波長約為695~710nm，處于近紅外區(qū)域。這種長波長激發(fā)和發(fā)射的特性使得CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發(fā)熒光干擾，從而提高成像的清晰度和準確性。

2.光穩(wěn)定性：CY5.5染料在生理條件下穩(wěn)定，不易受到光漂白的影響，能夠保持長時間的熒光信號。這使得CY5.5-卵清蛋白在長時間的成像實驗中仍能保持穩(wěn)定的熒光強度，適用于活體成像和實時檢測。

3.生物兼容性：CY5.5是水溶性染料，易于與蛋白質結合，且通常不會顯著影響蛋白質的功能或結構。卵清蛋白也具有良好的生物相容性，因此CY5.5-卵清蛋白在生物體內應用中具有較高的安全性。

三、應用

1.生物成像：CY5.5-卵清蛋白可用于熒光顯微鏡觀察、流式細胞分析、蛋白質印跡等應用中。通過與特定的抗體結合，可以用于檢測組織或細胞中的抗原，實現(xiàn)熒光成像和定量分析。

2.藥物研發(fā)：CY5.5-卵清蛋白的近紅外熒光發(fā)射特性使其能夠穿透生物組織，因此特別適合用于體內成像和藥物分布、代謝等方面的研究。通過監(jiān)測CY5.5-卵清蛋白在體內的分布和代謝情況，可以為藥物研發(fā)提供重要的信息。

3.免疫研究：卵清蛋白作為常用的載體蛋白，具有良好的免疫原性。CY5.5-卵清蛋白可用于免疫學研究，如作為免疫原制備抗體、研究免疫反應等。

四、合成方法

CY5.5標記卵清蛋白的過程通常包括以下幾個步驟：

1.將CY5.5-NHS酯溶解在少量無水有機溶劑（如DMSO或DMF）中，確保其在水溶液中不會快速水解。

2.在緩沖溶液中（如pH 8.0左右的PBS緩沖液）加入適量的卵清蛋白溶液。

3.緩慢加入CY5.5-NHS酯溶液到卵清蛋白溶液中，同時輕輕攪拌，以促進酯與蛋白質氨基的偶聯(lián)反應。通常在室溫或冰浴條件下反應1~2小時。

4.調整pH值以保持在8.0附近，有助于提高酰胺鍵的形成效率。

5.使用凝膠過濾或透析的方法去除未反應的CY5.5-NHS酯和其他小分子。

6.純化后得到的CY5.5標記卵清蛋白可以通過吸光度和熒光光譜測定標記效率。

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