Biotin hydrazide HCl（生物素酰肼鹽酸鹽）是一種重要的生物標(biāo)記試劑，其核心結(jié)構(gòu)由生物素基團(tuán)、酰肼基團(tuán)（-NH-NH?）和鹽酸鹽（HCl）組成，具有特殊的理化性質(zhì)和廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景。

一、理化性質(zhì)

1. 外觀與狀態(tài)：亮黃色或白色固體粉末，純度通常≥95%。

2. 分子式與分子量：分子式為C??H??ClN?O?S，分子量約為294.80 g/mol。

3. 溶解性：

• 溶于大部分有機(jī)溶劑（如DMSO，溶解度≤20 mg/mL）。

• 溶于水，鹽酸鹽形式顯著提高了水溶性，便于在水相緩沖液中反應(yīng)。

4. 熔點(diǎn)與沸點(diǎn)：熔點(diǎn)為245-247℃，沸點(diǎn)預(yù)測(cè)值為633.1±40.0℃（760 mmHg）。

5. 穩(wěn)定性：

• 鹽酸鹽形式更穩(wěn)定，便于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，避免游離酰肼的氧化變質(zhì)。

• 需避光保存，防止光照引起的分解。

結(jié)構(gòu)式：

二、核心功能

1. 酰肼基團(tuán)的反應(yīng)特異性：

• 酰肼基團(tuán)（-NH-NH?）可與醛基（-CHO）或酮基（-CO-）在弱酸性條件（pH 4.0-6.0）下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成穩(wěn)定的腙鍵（-C=N-NH-）。

• 這種反應(yīng)對(duì)醛/酮基具有高度特異性，不與氨基、羧基等其他基團(tuán)反應(yīng)，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)標(biāo)記。

2. 鹽酸鹽形式的優(yōu)勢(shì)：

• 顯著提高生物素酰肼的水溶性，使其能在水相緩沖液中溶解并反應(yīng)，無需添加有機(jī)溶劑。

• 形式更穩(wěn)定，便于長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

3. 生物素的高親和性：

• 偶聯(lián)后可通過親和素/鏈霉親和素系統(tǒng)高效富集目標(biāo)分子，富集效率可達(dá)90%以上。

• 適用于后續(xù)的檢測(cè)、分離或純化。

三、應(yīng)用場(chǎng)景

1. 糖蛋白標(biāo)記與純化：

• 通過高碘酸氧化糖蛋白的糖鏈生成醛基，再與Biotin hydrazide HCl偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)糖蛋白的特異性生物素化。

• 標(biāo)記后的糖蛋白可通過鏈霉親和素包被的磁珠或瓊脂糖珠進(jìn)行純化，獲得高純度糖蛋白，用于糖鏈結(jié)構(gòu)分析或功能研究。

2. 核酸標(biāo)記：

• 可與醛基修飾的DNA/RNA反應(yīng)，制備生物素化核酸探針。

• 用于Southern blot、Northern blot等雜交實(shí)驗(yàn)，提高檢測(cè)靈敏度。

3. 蛋白質(zhì)碳基化檢測(cè)：

• 作為探針用于檢測(cè)蛋白質(zhì)碳基化，這是一種由活性氧或脂質(zhì)氧化產(chǎn)物引起的不可逆翻譯后修飾。

• 在pH 5.5條件下，Biotin hydrazide HCl可專一性地衍生化碳基基團(tuán)，便于測(cè)量生物樣品中的碳基化蛋白質(zhì)。

4. 細(xì)胞表面標(biāo)記：

• 用于生物素化并分離細(xì)胞表面糖蛋白，有助于研究細(xì)胞表面分子的功能和相互作用。

四、使用注意事項(xiàng)

1. 安全防護(hù)：

• 操作時(shí)佩戴手套、護(hù)目鏡及實(shí)驗(yàn)服，避免直接接觸或吸入粉末。

• 避免形成粉塵和氣溶膠，使用非火花工具，防止靜電放電引起的火災(zāi)。

• 廢棄物按化學(xué)危險(xiǎn)品處理，不可隨意丟棄。

2. 儲(chǔ)存條件：

• 短期保存：2-8℃，避光。

• 長(zhǎng)期保存：建議冷藏，保持容器密封，防止受潮和光照。

3. 反應(yīng)優(yōu)化：

• 確保目標(biāo)分子含醛基或酮基，或通過氧化處理生成醛基。

• 控制反應(yīng)pH在4.0-6.0范圍內(nèi)，以獲得最佳標(biāo)記效率。

• 反應(yīng)后需通過透析、柱層析等方法去除未結(jié)合試劑。

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