Biotin-4-fluorescein（生物素-4-熒光素）是一種結(jié)合生物素與熒光素分子的熒光標(biāo)記化合物，在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛應(yīng)用。

一、基本信息

• CAS號(hào)：1032732-74-3

• 分子式：C??H??N?O?S

• 分子量：644.694 g/mol

• 外觀：橙黃色固體

• 溶解性：可溶于水和大多數(shù)有機(jī)溶劑，如DMSO、PBS等

• 穩(wěn)定性：在避光和低溫條件下儲(chǔ)存時(shí)較為穩(wěn)定，需避免反復(fù)凍融

結(jié)構(gòu)式：

二、結(jié)構(gòu)與功能

• 生物素部分：具有與親和素（如鏈霉親和素）高親和力結(jié)合的特性，確保了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。

• 熒光素部分：提供熒光信號(hào)，激發(fā)波長約為494 nm，發(fā)射波長約為521 nm（也有說法為518 nm），適用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)或ELISA等檢測(cè)技術(shù)。

• 連接臂：通常為4個(gè)碳原子的間隔臂，可減少空間位阻，提高標(biāo)記效率。

三、物理化學(xué)性質(zhì)

• 密度：1.6±0.1 g/cm3（也有預(yù)測(cè)值為1.55±0.1 g/cm3）

• 沸點(diǎn)：1038.0±65.0 °C（在760 mmHg條件下，為預(yù)測(cè)值）

• pH影響：熒光特性受pH影響，在堿性條件下熒光較強(qiáng)，熒光強(qiáng)度在pH 8-9時(shí)較高，需優(yōu)化緩沖液條件。

• 光穩(wěn)定性：熒光素易光漂白，操作時(shí)需避光并減少曝光時(shí)間。

四、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 生物分子標(biāo)記：

• 標(biāo)記蛋白質(zhì)、核酸等生物分子，簡化實(shí)驗(yàn)步驟。

• 標(biāo)記抗體或核酸探針，用于細(xì)胞或組織成像（免疫熒光染色）。

2. 熒光檢測(cè)：

• 適用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)等檢測(cè)技術(shù)。

• 標(biāo)記細(xì)胞表面生物素化抗體，結(jié)合熒光素信號(hào)分析細(xì)胞亞群。

3. 免疫分析：

• 結(jié)合到抗體上，用于ELISA、Western blot等免疫檢測(cè)方法，提升檢測(cè)靈敏度和特異性。

• 通過生物素-親和素系統(tǒng)放大信號(hào)，提高檢測(cè)靈敏度。

4. 定量分析：

• 用于準(zhǔn)確定量生物樣品中親和素與鏈霉親和素的濃度。

• 評(píng)估生物素結(jié)合位點(diǎn)或確定親和素/鏈霉親和素的濃度。

五、儲(chǔ)存與使用注意事項(xiàng)

• 儲(chǔ)存條件：建議室溫避光保存，或根據(jù)具體產(chǎn)品要求在-20°C下儲(chǔ)存。

• 使用注意事項(xiàng)：

• 操作時(shí)需避光，減少熒光素的曝光時(shí)間，以防止光漂白。

• 需優(yōu)化緩沖液條件，以確保熒光強(qiáng)度在最佳范圍內(nèi)。

• 僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)。

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