5-FITC-生物素（5-Fluorescein Isothiocyanate Biotin）是一種結(jié)合了熒光素異硫氰酸酯（FITC）和生物素（Biotin）特性的雙功能分子探針，在生物學(xué)研究和實驗中具有廣泛的應(yīng)用價值。

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

• 化學(xué)結(jié)構(gòu)：5-FITC-生物素由FITC和生物素通過共價鍵連接而成。FITC提供綠色熒光信號，生物素則提供與親和素（Avidin）或鏈霉親和素（Streptavidin）的高親和結(jié)合能力。

• 物理性質(zhì)：

• 外觀：橙黃色固體。

• 溶解性：溶于大部分有機溶劑，如DMSO（二甲基亞砜）、DCM（二氯甲烷）等，也溶于水。

• 穩(wěn)定性：在適當(dāng)?shù)拇鎯l件下（如-20℃，陰涼、干燥、通風(fēng)良好的庫房，避光保存），具有較高的穩(wěn)定性。

• 化學(xué)性質(zhì)：

• 熒光特性：FITC部分發(fā)射綠色熒光，激發(fā)波長約為495nm，發(fā)射波長約為519nm，適合多數(shù)熒光檢測儀器平臺。

• 親和特性：生物素部分與親和素或鏈霉親和素之間存在較高親和力（Kd ≈ 10^-15 M），是自然界中較強的非共價相互作用之一。

結(jié)構(gòu)式：

二、應(yīng)用領(lǐng)域

• 生物分子標(biāo)記：5-FITC-生物素可用于標(biāo)記蛋白質(zhì)、抗體、DNA等生物分子，通過熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)等設(shè)備觀察生物分子的分布和動態(tài)變化。

• 免疫檢測：在ELISA、Western Blot和免疫熒光等實驗中，5-FITC-生物素可作為二級抗體或探針標(biāo)記物，結(jié)合親和素或鏈霉親和素耦合物進(jìn)行特異性檢測。

• 親和純化：通過與親和素包被的固相或載體結(jié)合，利用生物素部分的高親和性進(jìn)行分離與純化，同時通過FITC提供標(biāo)記信號。

• 細(xì)胞成像與追蹤：可用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的熒光標(biāo)記，通過熒光顯微鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，以及標(biāo)記細(xì)胞表面分子或膜蛋白進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。

• 分子追蹤：在需要對生物素化分子（如DNA、蛋白、納米粒）進(jìn)行可視化分析時，5-FITC-生物素能直接提供熒光信號，便于實時追蹤。

三、技術(shù)優(yōu)勢

• 雙功能性：同時具備熒光標(biāo)記能力和高親和性結(jié)合能力。

• 高特異性：FITC標(biāo)記具有低背景、高靈敏度，Biotin-Avidin系統(tǒng)具有較高專一性。

• 實驗兼容性強：可與多種生物樣品（細(xì)胞、組織、蛋白等）兼容。

• 操作簡便：標(biāo)記步驟相對簡單，不需要復(fù)雜的設(shè)備和操作技巧。

四、使用注意事項

• 存儲條件：應(yīng)存儲于-20℃，陰涼、干燥、通風(fēng)良好的庫房，避光保存。取用時一定要保持干燥，避免頻繁解凍和冷凍。

• 安全操作：在使用過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守相關(guān)的安全操作規(guī)程，避免直接接觸皮膚和眼睛。

• 應(yīng)用范圍：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或診治。

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