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鏈霉親和素(SA)修飾二氧化硅微球的相關信息

2025-10-17 [35]

鏈霉親和素(SA)修飾二氧化硅微球是一種將鏈霉親和素(Streptavidin,SA)固定在二氧化硅微球表面的納米材料,結合了二氧化硅微球的高比表面積、粒徑均一性以及鏈霉親和素與生物素(Biotin)的高特異性結合能力,在生物醫學、生物檢測、免疫分析等領域具有廣泛應用。

一、特性與優勢

  1. 粒徑均一性

    • 二氧化硅微球具有良好的單分散性,粒徑范圍可在20納米至10微米之間選擇,滿足不同實驗需求。

    • 例如,50納米微球適用于高通量檢測和細胞內吞研究,200-400納米微球便于流式細胞術和光學識別。

  2. 高比表面積

    • 二氧化硅微球的高比表面積提供了較大的負載量,可用于高效的生物分子捕獲和分離。

  3. 低生物毒性

    • 適用于細胞和動物實驗,具有良好的生物相容性。

  4. 高特異性結合能力

    • 鏈霉親和素與生物素之間的結合是一種非常強力的非共價相互作用,解離常數(kd)約為10?1?,結合快速且穩定。

    • 鏈霉親和素不是糖蛋白,不與糖類受體結合,非特異性吸附更少,背景更低,信噪比更好。

二、制備方法

  1. 化學交聯法

    • 使用EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺)、NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)等交聯劑,將鏈霉親和素與微球表面的羧基(-COOH)或氨基(-NH?)反應,形成穩定的酰胺鍵或亞胺鍵。

    • 例如,通過EDC/NHS活化微球表面的羧基,再與鏈霉親和素的氨基反應,確保鏈霉親和素的活性不受影響。

  2. 生物素-鏈霉親和素橋接法

    • 先將生物素共價連接到微球表面,再通過鏈霉親和素與生物素的特異性結合實現修飾。

三、應用領域

  1. 生物醫學研究

    • 細胞標記:與生物素標記的抗體結合,特異性識別細胞表面抗原,利用熒光信號在顯微鏡下觀察細胞形態、結構及分子分布。

    • 蛋白質相互作用研究:捕獲目標蛋白,分析蛋白質間相互作用網絡。

    • 細胞內吞研究:追蹤微球被細胞攝取的過程,探索細胞內吞機制和胞內運輸路徑。

  2. 診斷分析

    • 免疫檢測:與生物素標記的抗體結合,用于ELISA、側向層析技術(LFA)等,提高檢測靈敏度。例如,在熒光原位雜交(FISH)中,SA微球可捕獲生物素標記的DNA探針,增強信號強度。

    • 生物傳感器:作為信號放大的工具,提高檢測靈敏度。例如,結合生物素化探針,實現PCR產物捕獲、基因序列檢測等,適用于病原體檢測和基因突變分析。

  3. 藥物遞送

    • 作為藥物載體,通過SA-生物素系統靶向遞送藥物或基因至特定細胞。例如,將生物素化的藥物與SA微球結合,實現靶向給藥。

  4. 分離和純化

    • 將鏈霉親和素固定在基質上,與生物素標記的目標生物分子結合,實現特異性分離和純化。修飾熒光微球后,可通過熒光信號實時監測分離進程和效率。

四、儲存與使用注意事項

  • 儲存條件:密封后于4℃冷藏保存,避免凍存導致微球團聚或活性喪失。

  • 緩沖液選擇:使用pH 7.2-7.4的緩沖液(如PBS),維持鏈霉親和素活性。

  • 結合條件:控制反應溫度(如室溫或37℃)和時間(數小時),確保充分結合。

  • 洗滌步驟:用含0.05% Tween-20的緩沖液洗滌3次,去除未結合的鏈霉親和素或生物素化分子。

  • 安全操作:僅供科研使用,不可用于人體實驗或食品接觸。操作時佩戴手套,避免吸入微球粉末;取用前充分混勻,防止濃度變化。

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